Generación de progenitores neurales a partir de células madre embrionarias en cultivos monocapa sin suero

Comience con un cultivo de células madre embrionarias de ratón.

Lave las células con un tampón para eliminar los medios y los restos celulares.

Agregue un cóctel de enzimas para separar las células de la superficie del matraz.

Agregue medios para detener la actividad enzimática y recolectar las células en un tubo. Centrifugar y desechar el sobrenadante que contiene enzimas.

Resuspender las células en medios de cultivo neuronales libres de suero.

Siembre las células en pocillos de placas de pocillos múltiples recubiertos de gelatina.

incubar. Las células madre embrionarias se adhieren a la superficie recubierta de gelatina. Los componentes de los medios, incluidos los nutrientes, los factores de crecimiento y las hormonas, facilitan la proliferación celular y forman una monocapa.

A esta densidad celular, las células madre embrionarias producen y liberan niveles óptimos de factores de crecimiento y citocinas.

Estas moléculas desencadenan vías de señalización intracelular, facilitando la diferenciación de las células madre embrionarias en progenitores neurales.

Mezcle la gelatina con 500 mililitros de PBS tibio y cubra el fondo del recipiente de cultivo celular con la solución suficie