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Neurociencia
0 vistas • 2:51 min • July 8th, 2025
Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga un inserto poroso que sostenga un andamio de poliestireno que posea una estructura porosa tridimensional.
Agregue etanol para rehidratar el andamio y lávelo con el medio.
Introducir un medio que contenga una proteína de la matriz extracelular, la laminina. Incube para permitir que la laminina cubra el andamio.
Siembre las células madre neurales humanas en un medio neural que contenga factores de crecimiento en el andamio recubierto de laminina.
Incubar para permitir la migración de células madre al andamio poroso donde la laminina promueve la adherencia celular al andamio.
Las células utilizan los factores de crecimiento y proliferan dentro de este andamio.
Agregue un medio neuronal libre de factores de crecimiento y reemplace regularmente el medio gastado para mantener la viabilidad celular.
La ausencia de factores de crecimiento estimula la diferenciación de las células madre en células progenitoras neurales.
Con el tiempo, los procesos neuronales de estas células progenitoras se alargan, permitiendo el crecimiento celular multidireccional y formando un cultivo tridimensional.
Rehidratar los andamios agregando a cada pocillo de la placa Alvetex de 12 pocillos, 2 mililitros de etanol al 70%, preparados con agua para riego. Evite tocar los andamios dispensando el etanol al 70% por la pared de cada pozo. Aspire cuidadosamente el etanol al 70% y lave inmediatamente los andamios con 2 mililitros por pocillo de DMEM F12 durante un minuto.
Repita el procedimiento de lavado dos veces. Aspira con cuidado el DMEM F12 después del lavado final. Cubra los andamios agregando 2 mililitros de laminina en DMEM F12 a cada pocillo. Incube la placa a 37 grados centígrados en una incubadora humidificada con dióxido de carbono al 5% durante un mínimo de dos horas.
A continuación, lave la placa con DMEM F12 tibio. Siembre cada andamio con aproximadamente 500,000 células madre neurales humanas o HNSC en un volumen de 150 microlitros de medio RMM con factores de crecimiento. Incube la placa durante tres horas para permitir que las células se asienten en los andamios.
Después de tres horas, agregue 3,5 mililitros de RMM a cada pozo, teniendo cuidado de no desalojar las células de los andamios. Incube la placa durante siete o 21 días. Reemplace el medio después de un día, que es la primera alimentación, y reemplace el medio nuevamente 2 o 3 días después de la primera alimentación.