Diferenciación de células madre neuronales humanas en cultivo 3D utilizando un andamio poroso

Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga un inserto poroso que sostenga un andamio de poliestireno que posea una estructura porosa tridimensional.

Agregue etanol para rehidratar el andamio y lávelo con el medio.

Introducir un medio que contenga una proteína de la matriz extracelular, la laminina. Incube para permitir que la laminina cubra el andamio.

Siembre las células madre neurales humanas en un medio neural que contenga factores de crecimiento en el andamio recubierto de laminina.

Incubar para permitir la migración de células madre al andamio poroso donde la laminina promueve la adherencia celular al andamio.

Las células utilizan los factores de crecimiento y proliferan dentro de este andamio.

Agregue un medio neuronal libre de factores de crecimiento y reemplace regularmente el medio gastado para mantener la viabilidad celular.

La ausencia de factores de crecimiento estimula la diferenciación de las células madre en células progenitoras neurales.

Con el tiempo, los procesos neuronales de estas células progenitoras se alargan, permitiendo el crecimiento celular multidireccional y formando un cultivo tridimensional.

Rehidratar los andamios agregando a cada pocil