Generación y diferenciación de neuroesferas primarias a partir de células madre neurales de pez cebra

Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga un medio de crecimiento enriquecido con factores de crecimiento.

Siembre una suspensión unicelular de células madre neurales de pez cebra e incube.

Inicialmente, las células madre utilizan los factores de crecimiento y proliferan.

Elimine los desechos y agregue el medio nuevo para promover la proliferación celular continua y la agregación espontánea para formar neuroesferas primarias que flotan libremente.

A continuación, transfiera las neuroesferas a un pozo nuevo que contenga el medio de crecimiento.

Incubar en las mismas condiciones para inducir una expansión progresiva de las neuroesferas.

Pipetear repetidamente para disociar mecánicamente las neuroesferas en pequeños grupos.

A continuación, transfiéralos a una matriz extracelular bien recubierta, facilitando su adhesión.

Reemplace el medio de crecimiento con un medio de diferenciación sin factor de crecimiento que contenga insulina.

La ausencia de factores de crecimiento y la presencia de insulina estimulan la diferenciación celular en células gliales y neuronas con proyecciones neuronales.

Para prepararse para la generación de neuroesferas, llene cada pocillo de una pl