Una técnica de cocultivo para diferenciar células progenitoras neurales humanas en neuronas

Tome un cultivo de células progenitoras neurales humanas, o NPC, apoyadas en una matriz extracelular.

Los NPC están diseñados para expresar una proteína fluorescente.

Deseche el medio y lave las células para eliminar cualquier medio residual.

Incubar el cultivo con enzimas que alteran la matriz, disociando las células.

Transfiera las células desprendidas a un tubo y agregue un medio para neutralizar la acción enzimática.

Centrifugar para granular las células, desechar el sobrenadante y volver a suspender las NPC en un medio de diferenciación neuronal.

Transfiera los NPC a un cocultivo establecido de astrocitos de ratón y neuronas corticales de rata.

Los factores de crecimiento liberados por el cocultivo establecido, junto con los contactos célula-célula de las NPC con las neuronas corticales y los astrocitos, promueven la diferenciación de las NPC en neuronas maduras.

Las neuronas maduras exhiben procesos celulares extendidos y forman conexiones sinápticas.

Bajo un microscopio confocal, use la señal de las proteínas fluorescentes para visualizar las neuronas humanas derivadas de NPC.

Después de generar células madre pluripotentes inducidas o iPSC, inducir y mantener las células com