Desarrollo de un cocultivo de neuronas y macrófagos in vitro

Comience con neuronas ganglionares de la raíz dorsal murina aisladas en un medio de crecimiento.

Sembréelos en una placa de pocillos múltiples recubierta de polímero para promover la unión neuronal.

A continuación, tome un ratón eutanasiado diseccionado e inyecte PBS helado en su cavidad peritoneal.

Masajee suavemente el peritoneo para desalojar los macrófagos de la pared del peritoneo.

Apriete el ratón para recolectar el líquido peritoneal y trátelo con un tampón de lisis para lisar selectivamente los glóbulos rojos, que aparecen como contaminantes. Centrifugar y resuspender las células en un medio de cultivo.

Transfiera los macrófagos a un inserto poroso colocado dentro del pocillo que contiene las neuronas cultivadas.

Este cocultivo permite que las neuronas y los macrófagos estén muy cerca.

Tratar el cocultivo con db-cAMP e incubar para facilitar su entrada en las células. Esto activa las neuronas para secretar las moléculas de señalización.

Estas moléculas de señalización, junto con db-cAMP, inducen a los macrófagos a adoptar un fenotipo pro-regenerativo y secretar factores esenciales para el crecimiento neuronal.

Antes de configurar el cultivo, recubra previamente una placa de