Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:32 min. • July 8th, 2025
Comience con monofosfato de adenosina cíclico, o cAMP, una molécula de señalización que regula varias funciones celulares. Agregue cAMP a un cocultivo de neuronas y macrófagos.
Las moléculas de AMPc del medio y los factores de crecimiento de las neuronas desencadenan la activación de macrófagos.
Transfiera el inserto con macrófagos activados a otro pocillo que contenga un medio de cultivo de macrófagos.
Aquí, los macrófagos liberan citocinas y quimiocinas en el medio, formando un medio condicionado o CM.
Centrifugar el CM para granular los componentes celulares.
Transfiera el sobrenadante y el filtro para eliminar los desechos celulares.
Agregue el MC recolectado a un cultivo neuronal. Las citocinas y quimiocinas en el CM recolectado promueven las extensiones neuronales.
Agregue paraformaldehído frío para fijar las células.
Agregue un tampón de bloqueo para evitar la unión inespecífica de anticuerpos. Lave para eliminar el tampón residual.
Aplicar anticuerpos primarios que se dirigen a las proteínas citoesqueléticas de las neuronas. Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.
Agregue anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo rojo que se unan a los anticuerpos primarios.
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