Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:06 min. • July 8th, 2025
Comience agregando células neuronales a un medio adecuado en una placa de cultivo.
Agregue nanopartículas magnéticas fluorescentes, o MNP, que contengan un núcleo magnético etiquetado con un tinte fluorescente.
Durante la incubación, la célula absorbe el MNP a través de la endocitosis y se magnetiza.
Coloque un sustrato limpio con patrones magnetizados en una placa de cultivo. Este sustrato de vidrio tiene patrones geométricos incrustados con propiedades magnéticas.
Esterilice el sustrato exponiéndolo a la luz ultravioleta.
Cubra el sustrato con colágeno para promover la adhesión celular.
Agregue las células cargadas con MNP al sustrato e incube.
El campo magnético externo del sustrato atrae las células cargadas con MNP, lo que permite su unión.
Agregue un medio que contenga un factor de crecimiento específico a intervalos regulares.
El factor de crecimiento ayuda a las células a formar extensiones, mientras que el patrón magnético del sustrato dirige la orientación de estas extensiones.
Siembre 1 millón de células en un plato regular de 35 milímetros sin recubrimiento. Agregue el volumen calculado de suspensión de MNP y medio de diferenciación al plato para lograr la concentración de MNP deseada. Mezcle las células, los MNP y el medio de diferenciación, luego incube el plato en una incubadora humidificada con dióxido de carbono al 5% a 37 grados Celsius durante 24 horas.
Limpie el sustrato estampado con etanol al 70% y colóquelo en una placa de cultivo de 35 milímetros en la campana. Coloque un imán grande debajo del sustrato estampado durante un minuto, luego retírelo moviendo el plato hacia arriba y hacia afuera, y sacando el imán de la campana. Encienda la luz ultravioleta durante 15 minutos.
Para preparar un sustrato de vidrio recubierto de colágeno, diluya el colágeno tipo I en una proporción de 1 a 50 en etanol al 30%. Cubre el vaso con la solución. Deje el plato destapado en la campana durante cuatro horas hasta que se evapore toda la solución. Luego, lávelo tres veces en PBS estéril. Retire las células de la incubadora. Centrifugar la suspensión celular durante 5 minutos a 200 g y desechar el sobrenadante. Vuelva a suspender las células en 1 mililitro de medio de diferenciación fresco y cuente las células con un hemocitómetro.
Siembre 105 células sobre el sustrato en una placa de cultivo de 35 milímetros y agregue 2 mililitros de medio de diferenciación. Incube el cultivo en una incubadora humidificada con dióxido de carbono al 5% a 37 grados centígrados. Después de 24 horas, agregue de 1 a 100 beta-NGF murino fresco a las células. Renueve el medio de diferenciación y agregue beta-NGF fresco cada dos días.