Diferenciación de células madre embrionarias humanas en progenitores neurales

Comience con una placa de pocillos múltiples recubierta con una matriz de membrana basal que incluya polímeros extracelulares y proteínas de adhesión.

Siembre los pocillos con una suspensión unicelular de células madre embrionarias humanas en un medio de crecimiento que contenga un inhibidor de la Rho-quinasa.

Incubar para permitir la adhesión de las células madre a la matriz.

Las células absorben el inhibidor, que bloquea las enzimas Rho-quinasa y previene la muerte celular apoptótica.

Esto promueve la supervivencia de las células y las mantiene en un estado indiferenciado.

Reemplace el medio de crecimiento con un medio de inducción neural rico en factores de crecimiento y que contenga inhibidores que se dirijan a receptores ALK específicos.

Estos inhibidores interactúan con sus receptores y bloquean las vías de señalización BMP y TGF-β, evitando la diferenciación celular en precursores endodérmicos o mesodérmicos.

Esto conduce a la diferenciación selectiva de las células madre en precursores ectodérmicos.

Estos precursores ectodérmicos utilizan nutrientes y factores de crecimiento del medio para multiplicarse y luego diferenciarse en células progenitoras neurales.

Coloque las células en una placa de 6 pocillos recubierta de matriz de membrana basal a una densidad de 2 x 10⁵ células por pocillo en 2 mililitros de mTeSR1 con 10 inhibidores micromolares de ROCK. Después de 24 horas, reemplace el medio de cultivo con medio de inducción neural suplementado con 1 dorsomorfina micromolar y 5 SB431542 micromolares. Cambiar el medio cada dos días durante los primeros cuatro días de inducción neural, luego todos los días, hasta que se alcance la confluencia en el día siete.