Aislamiento y cultivo de microglía a partir de cerebros de rata utilizando medios sin suero

Tomemos un cerebro de rata perfundido. Picarlo en pequeños fragmentos.

Homogeneizar el tejido en un tampón para liberar células, incluida la microglía.

Una vez que el tejido no digerido se asiente, recolecte las células que contienen sobrenadante y agregue un tampón de separación de mielina.

Mezcle el contenido y centrifugue para separar las células de la mielina y los desechos. Retire la capa de restos de mielina y el sobrenadante.

Vuelva a suspender las células en el tampón y la pipeta para separar los grupos.

Pasar la suspensión a través de un colador para eliminar los agregados celulares restantes.

Transfiera las células filtradas a una placa de cultivo recubierta con anticuerpos monoclonales específicos de la microglía. Incubar para facilitar la adhesión de la microglía.

Lavar con tampón para eliminar las células no adherentes. Agregue tripsina e incube para aflojar la microglía.

Eliminar la tripsina.

Agrega medios sin suero. Incubar en hielo para debilitar las interacciones célula-sustrato.

Pipetear y recoger la suspensión en un tubo. Centrifugar y eliminar el sobrenadante.

Vuelva a suspender la microglía en medios sin suero y transfiérala a una placa de pocillos múltiples re