Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:44 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de cultivo recubierta con un sustrato de cultivo celular para facilitar la adhesión celular.
La placa contiene un inserto de cultivo de un pocillo sin una base unida a su centro, creando un compartimento definido. El contorno de este compartimento está marcado en el plato para observar la migración celular.
Introducir una suspensión celular en el compartimento que contiene células endoteliales periventriculares o PVEC, células que recubren los vasos sanguíneos en el cerebro e interneuronas que migran a lo largo de las PVEC durante el desarrollo del cerebro.
Agregue un medio de cocultivo a la placa para mantener la humedad e incube para facilitar que las células se adhieran al sustrato.
Retire el inserto para eliminar la barrera física; refresque el medio e incube nuevamente.
Los PVEC proliferan, expandiendo la red de células endoteliales más allá del límite de inserción.
Los PVEC secretan factores que actúan como señales de guía, dirigiendo las interneuronas para migrar a lo largo de la red PVEC.
La cocultura que exhibe la migración interneuronal está lista para su análisis.
Para realizar el ensayo de cocultivo, suspenda 30.000 interneuronas GABAérgicas y 30.000 células endoteliales periventriculares humanas en 70 microlitros de medio de cocultivo. Luego, siembre esta solución celular dentro de un compartimento de inserción de un pocillo. Después de 48 horas, retire el inserto. Incubar el cocultivo a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante cinco días.