Generación de organoides cerebelosos maduros a partir de células madre pluripotentes inducidas utilizando biorreactores de un solo uso

Semilla de células madre pluripotentes inducidas por humanos, o iPSC, en un biorreactor. Las iPSC se resuspenden en un medio que contiene un inhibidor de la apoptosis celular.

Bajo un campo magnético, la rueda vertical del biorreactor gira a una velocidad controlada, lo que facilita el contacto célula-célula y la formación de agregados. Retire la mayor parte del medio y agregue medios nuevos sin el inhibidor.

Continúa cultivando. Una vez que los agregados alcancen un tamaño óptimo, déjelos asentarse por gravedad. Retire el medio.

Agregue medios de diferenciación que contengan factores de crecimiento y cultivo con una velocidad reducida de la rueda del biorreactor. Los factores de crecimiento promueven la diferenciación neuronal dentro de los agregados.

A continuación, agregue medio fresco complementado con factores de crecimiento y quimiocinas que induzcan el desarrollo de progenitores cerebelosos.

Gradualmente, los progenitores cerebelosos se organizan en distintas capas dentro de los agregados, formando organoides cerebelosos tempranos.

Finalmente, agregue un medio neuronal que contenga factores neurotróficos específicos.

Estos factores inducen la maduración del progenitor cerebe