Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 6:18 min. • July 8th, 2025
Tomemos un cerebro de ratón perfundido que contenga un tumor.
El paso de perfusión elimina las células inmunitarias circulantes pero retiene las células infiltradas por el tumor.
Aísle el tejido que contiene el tumor.
Ahora, disocia mecánicamente el tejido.
La fuerza mecánica afloja el tejido, liberando las células.
Transfiera el tejido disociado a un tubo.
Centrifugar y desechar el sobrenadante que contiene los residuos.
Vuelva a suspender el tejido en una solución de digestión que contenga colagenasa y ADNasa.
La colagenasa degrada la matriz extracelular, liberando las células. La ADNasa degrada el ADN contaminante.
Agregue un búfer para detener la actividad enzimática.
Filtre la suspensión para eliminar los agregados celulares y obtener una suspensión unicelular.
Centrifugar y desechar el sobrenadante.
Vuelva a suspender las celdas en un medio de gradiente de alta densidad. Ahora, superponga con un medio de gradiente de menor densidad, formando un gradiente de separación con una interfaz clara.
Centrifugar para separar capas. Las células inmunitarias se reúnen en la interfaz entre los medios de gradiente mientras los restos celulares flotan en la parte superior.
Recolecte las cé
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