Eliminación selectiva de la microglía de un cultivo de neuronas de gránulos cerebelosos de rata
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:58 min. • July 8th, 2025
Tome un cerebelo de rata cosechado y córtelo en fragmentos.
Transfiera los fragmentos a un tubo que contenga tripsina e incube.
La tripsina digiere la matriz extracelular del tejido, aflojando las neuronas granulares cerebelosas, así como las células no neuronales como la microglía y los astrocitos.
Agregue un tampón que contenga un inhibidor de tripsina y ADNasa. El inhibidor inactiva la tripsina mientras que la ADNasa degrada el ADN contaminante.
Centrifugar y desechar el sobrenadante.
Vuelva a suspender el tejido en un tampón que contenga el inhibidor y la ADNasa, y disociarlo mecánicamente para formar una suspensión unicelular.
Superponga la suspensión sobre una solución tampón que contenga proteínas.
Centrifugar y desechar el sobrenadante que contiene restos celulares.
Vuelva a suspender las células en el medio y siembre en cubreobjetos recubiertos de poli-L-lisina para facilitar la unión celular.
Retire el medio. Lave las células con medios nuevos y luego agregue medios que contengan un inhibidor del ciclo celular para prevenir la proliferación de células gliales.
Reemplace la mitad del medio con medios nuevos que contengan un inhibidor de lisosomas.
El inhibidor se dirige se
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