Establecimiento de un cultivo tridimensional de células gliales derivadas del cerebro de rata

Tome una microplaca con un cultivo adherente de células gliales derivadas de un cerebro de rata. El cultivo contiene astrocitos, microglía y oligodendrocitos.

Retire el medio, incube con una solución enzimática para separar las células y luego transfiéralas a un tubo.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante con restos celulares. Vuelva a suspender las células en un medio tibio.

Triturar con una jeringa para romper los grumos celulares y filtrar con un colador para obtener una suspensión unicelular.

Agregue un biopolímero fotoreticulable, agentes de reticulación y componentes de matriz extracelular.

Vierta la mezcla en un molde unido a un cubreobjetos. Exponga la mezcla a luz de alta intensidad para inducir la reticulación, formando un gel y encapsulando las células gliales.

Retire el molde y coloque los cubreobjetos en una microplaca. Agregue un medio tibio e incube el gel en condiciones fisiológicas.

Las células proliferan dentro de la matriz extracelular de soporte y crean una red celular, estableciendo un cultivo tridimensional de células gliales.

24 horas antes de la encapsulación celular, aspire el medio de cultivos primarios de dos semanas y agregue 1 mililitro de medio fresco