Diferenciación de células madre pluripotentes humanas transgénicas y no transgénicas en células progenitoras neurales

Tome una placa de pocillos múltiples recubierta con una matriz extracelular o ECM.

En pocillos separados, introduzca células madre pluripotentes humanas no transgénicas y transgénicas, o hPSC, en un medio de cultivo.

Las hPSC transgénicas portan un transgén bajo un promotor inducible por antibióticos. El transgén codifica un factor de transcripción que induce la diferenciación neuronal.

Incubar para facilitar la adhesión celular a la ECM. Las moléculas pequeñas en el medio previenen la apoptosis, promoviendo la proliferación celular.

Agregue una solución de desprendimiento para disociar las células; agregue el medio para detener la disociación y luego transfiéralas a otra microplaca recubierta de ECM para permitir la proliferación celular.

Introducir un medio de diferenciación neural que contenga moléculas pequeñas en las células no transgénicas y el antibiótico inductor en las células transgénicas.

Las moléculas pequeñas inducen a las células no transgénicas a diferenciarse en células progenitoras neurales o NPC. En las células transgénicas, la expresión inducida por antibióticos del factor de transcripción activa los genes necesarios para la diferenciación en NPC.

Mantener los NP