Generación de esferas de cocultivo en 3D de astrocitos y neuronas para inducir la formación de sinapsis
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:26 min. • July 8th, 2025
Tome una placa de pocillos múltiples recubierta con un surfactante para reducir la tensión superficial del pocillo.
Agregue la proporción deseada de astrocitos y neuronas en un medio de cultivo adecuado.
Centrifugar para asentar las células y luego incubar.
La baja tensión superficial evita que las células se adhieran a la superficie del pocillo, lo que provoca su agregación.
Las células se adhieren entre sí a través de varias interacciones de membrana, incluidas las moléculas de adhesión, formando una esfera de cocultivo 3D.
Recoge las esferas y transfiérelas a un tubo.
Deja que las esferas se asienten. Retire el sobrenadante y agregue un medio de cultivo fresco.
Transfiera las esferas a un matraz giratorio que contenga un medio de crecimiento adecuado e incube con centrifugado constante.
En la esfera, las neuronas extienden proyecciones entre sí, formando una unión llamada sinapsis, mientras que el astrocito se extiende hacia la sinapsis, estableciendo una estrecha asociación con las neuronas.
Agregue la proporción deseada de hAstros y hNeurons o iNeurons disociados en un volumen total de dos mililitros a cada pocillo de una microplaca. Centrifugar la placa a 100 veces g durante
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