Aislamiento de neuronas DRG y cocultivo con precursores de células de Schwann para generar células de Schwann

Tomemos la médula espinal de un embrión de rata con ganglios de la raíz dorsal adheridos, o DRG, que contienen neuronas y células gliales.

Separe los DRG individuales del cable, transfiéralos a un tubo y centrifuge, desechando cualquier resto de tejido.

Agregue enzimas para disociar las neuronas DRG y las células gliales.

Gire las celdas y elimine cualquier residuo. Agregue un medio de mantenimiento neuronal y triture para generar una suspensión unicelular.

Transfiera la suspensión a una microplaca recubierta con un sustrato de cultivo, promoviendo la adherencia celular.

Introducir un medio de purificación e incubar. Los agentes inhibidores del medio eliminan las células gliales en división, mientras que las neuronas que no se dividen sobreviven.

Tome células similares a células de Schwann, o CPCP, en un medio de cocultivo. Los CPCP, precursores de las células de Schwann, interactúan con las neuronas nerviosas periféricas embrionarias.

Introduzca la suspensión en las neuronas DRG e incube. La interacción de los CPCP con las neuronas DRG promueve su maduración en células de Schwann.

Las células de Schwann generadas están listas para su análisis.

Para cosechar los ganglios de la raíz