Replaticado de neuronas diferenciadas derivadas de células madre pluripotentes humanas

Comience con una placa de cultivo grande que contenga neuronas diferenciadas derivadas de células madre pluripotentes humanas con una red neuronal densa.

Incube estas neuronas con enzimas proteolíticas suaves para separarlas de la placa, levantándolas como una hoja.

Con la incubación continua, las enzimas interrumpen parcialmente las conexiones celulares, aflojando las redes neuronales.

Agregue un medio de cultivo para detener la actividad enzimática.

Pipetea repetidamente las neuronas separadas para separarlas entre sí.

Filtre las neuronas a través de un filtro celular para eliminar los grupos celulares y recolectar las neuronas individuales.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante. Vuelva a suspenderlos en un medio de crecimiento.

Para volver a colocar, siembre estas neuronas en un polímero y una placa de múltiples pocillos recubierta de proteína de adhesión. Incubar para permitir su unión.

Las neuronas utilizan nutrientes del medio para seguir siendo viables. Reemplace el medio de cultivo regularmente para mantener los niveles de nutrientes.

Incubar más para permitir la maduración neuronal y la formación de conexiones entre ellas.

Comience enjuagando suavemente la placa de neuron