Estimulación de la diferenciación de las células madre nerviosas mediante el tratamiento con plasma atmosférico frío

Comience con células madre nerviosas cultivadas en un cubreobjetos recubierto de matriz extracelular en un medio de diferenciación adecuado.

Tome una jeringa que contenga un plasma frío, que es un estado de la materia que contiene varios componentes reactivos, incluida la radiación UV y las partículas cargadas.

Coloque la boquilla de la jeringa de plasma a una altura específica por encima del cultivo de células nerviosas.

Inicie el chorro de plasma.

El plasma interactúa con las células madre nerviosas, activándolas.

Retire el medio de cultivo viejo. Agregue un medio de cultivo fresco e incube.

Con el tiempo, las células madre nerviosas activadas producen proyecciones.

Deseche el medio.

Bajo un microscopio óptico de contraste de fase invertida, la presencia de proyecciones alargadas en las células, parecidas a las que se encuentran en una célula nerviosa, indica diferenciación.

Para tratar con plasma las células madre neurales, establezca la distancia entre la boquilla de la jeringa y el primer pocillo de células en 15 milímetros. Reemplace los sobrenadantes en los cultivos de células madre neurales con 800 microlitros de medio de diferenciación fresco y coloque la placa debajo de los chorros de plasma.

Asegurándose de que la boquilla de la jeringa esté fijada sobre el centro de cada pocillo, cree tres pocillos con plasma durante 60 segundos por tratamiento y tres pocillos con helio al 1% y oxígeno gaseoso durante 60 segundos por tratamiento, dejando tres pocillos sin tratar como controles. Luego, reemplace los sobrenadantes con un mililitro de medio de diferenciación fresco y devuelva las células a la incubadora durante seis días. Compruebe diariamente el estado de diferenciación de los diferentes grupos bajo un microscopio óptico de contraste de fase invertida.

Después del tratamiento, deje que las células se equilibren completamente en el medio acondicionado durante aproximadamente una hora antes de reemplazar el sobrenadante con un medio de diferenciación fresco.