Generación de precursores de interneuronas corticales a partir de células madre embrionarias de ratón

Tome células madre embrionarias de ratón suspendidas en medios sin suero que contienen inhibidores de moléculas pequeñas.

Siembre las células en una placa de cultivo no adherente, lo que les permite proliferar y agregarse para formar cuerpos embrioides tridimensionales o EB.

Además, los inhibidores bloquean las vías de señalización no neuronales e inducen la diferenciación de células madre embrionarias hacia un destino neural cortical.

Transfiera los EB a un tubo, centrífugo y retire el sobrenadante.

Vuelva a suspender los EB en una solución que contenga un cóctel enzimático y ADNasa.

Las enzimas disocian los EB en células individuales, mientras que la ADNasa degrada el ADN contaminante.

Agregue medios sin suero que contengan inhibidores para detener la actividad enzimática, luego centrifugue y elimine las enzimas que contienen sobrenadante.

Vuelva a suspender las células en medios que contengan inhibidores de moléculas pequeñas y transfiéralas a placas de cultivo recubiertas con factores de adhesión.

Las células se adhieren a la superficie de la placa recubierta.

Los inhibidores previenen la muerte celular apoptótica e inducen la diferenciación celular en progenitores interneurona