Generación de progenitores neurales a partir de células madre embrionarias de ratón mediante el método de la gota colgante

Tome una suspensión de células madre embrionarias de ratón.

Centrifugar, eliminar el sobrenadante y volver a suspender las células en un medio de diferenciación neural.

Coloque las gotas de la suspensión en el lado interior de la tapa de una placa de cultivo.

Agregue un tampón a la placa inferior para evitar que las gotas se sequen. Coloque la tapa en la placa inferior, formando un cultivo de gota colgante, e incube.

Debido a la gravedad, las células se agrupan y forman agregados tridimensionales denominados cuerpos embrioides o EB.

Coloque las gotas en una placa que contenga el medio de diferenciación e incube bajo agitación para el crecimiento de EB.

Centrifugar y retirar el medio; volver a suspender los EB en el medio de diferenciación suplementado con ácido retinoico, transferirlos a una placa de cultivo e incubar.

El ácido retinoico ingresa a las células y desencadena la formación de un complejo de transcripción. El complejo induce la expresión génica, desencadenando la diferenciación en células progenitoras neurales.

Los EB diferenciados están listos para aplicaciones posteriores.

Comience configurando el cultivo de células de gota colgante. Para una placa de cultivo celular