Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:15 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa multipocillo recubierta de gelatina que contenga células progenitoras neurales derivadas de células madre embrionarias de ratón en un medio de diferenciación basal rico en nutrientes.
Las células progenitoras utilizan estos nutrientes del medio para mantener su viabilidad.
Incube para permitir la adhesión celular a la superficie recubierta de gelatina, luego lave para eliminar las células y los desechos sueltos.
Introducir un medio de diferenciación basal complementado con un agente estabilizador, nutrientes adicionales y factores de crecimiento neural cruciales para la diferenciación celular y luego incubar.
Las células progenitoras consumen los nutrientes y factores de crecimiento, iniciando su diferenciación en neuronas que comienzan a extender sus procesos celulares.
Al mismo tiempo, el agente estabilizador interactúa con metabolitos tóxicos y protege las neuronas en desarrollo del daño oxidativo, preservando su viabilidad.
Reemplace regularmente el medio para mantener los niveles de nutrientes.
Con el tiempo, las neuronas maduran y desarrollan axones, los procesos celulares más largos.
Además, también desarrollan dendritas, los procesos celulares más cortos, lo que confirma la diferenciación de las células madre en neuronas.
Siembre alrededor de 500,000 derivados de células madre embrionarias de ratón en 2 mililitros de medio de diferenciación basal por pocillo en las placas recubiertas de gelatina al 0.1%. Divida aleatoriamente los derivados en tres grupos para probar tres protocolos de diferenciación de fase II. Incuba el plato durante seis horas. Luego, lave las células dos veces con 2 mililitros de PBS y agregue 2 mililitros de medio de diferenciación basal, N2 B27 medio 1 o N2 B27 medio 2 a cada pocillo, según el protocolo. Coloque las placas en la incubadora y deje que las células se diferencien durante otros 10 días, cambiando el medio correspondiente cada dos días.