Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 5:12 min. • July 8th, 2025
Comience con un cerebro de cachorro de ratón.
Aísle el cerebelo y obtenga cortes de tejido de grosor adecuado.
Transfiera las rodajas a insertos de membrana colocados dentro de los pocillos de placas de cultivo que contienen medios.
En los pocillos tratados, el medio contiene un compuesto de prueba neuroprotector. Los pozos de control carecen del compuesto. Incubar.
En condiciones de control, las células cerebelosas de Purkinje sufren apoptosis, imitando el desarrollo postnatal temprano in vivo.
En los pocillos tratados, dependiendo de su potencial, el compuesto puede proteger a las células de la apoptosis.
Lave las rodajas y fíjelas para preservar la integridad celular.
Transfiera las rodajas a una solución que bloquee la permeabilización para permeabilizar las membranas celulares y bloquear los sitios de unión no específicos.
Superposición con anticuerpos primarios dirigidos a una proteína de unión al calcio expresada específicamente en células de Purkinje.
Lave e introduzca anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos dirigidos a los anticuerpos primarios.
Contratiñe los núcleos con un tinte de unión al ADN y monta las rodajas.
Usando un microscopio confocal, cuantifique l
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