Disociación y cultivo de neuronas a partir de muestras de tejido del hipocampo

Comience con muestras de tejido del hipocampo que contienen neuronas y varias células no neuronales.

Agregue una solución de enzima proteasa. La enzima degrada la matriz extracelular del tejido, iniciando la disociación celular.

Lavar con un medio de recubrimiento para eliminar las enzimas residuales.

Pipetear el tejido digerido repetidamente para disociar mecánicamente las células del tejido, formando una suspensión unicelular.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante. Vuelva a suspender las celdas en el medio de recubrimiento.

Siembre las células en un cubreobjetos recubierto de poli-D-lisina en una placa de pocillos múltiples. La lisina mejora la unión celular.

Reemplace el medio de recubrimiento con un medio de mantenimiento neuronal que contenga nutrientes esenciales para la supervivencia de las neuronas.

Refresque la mitad del medio con medios de mantenimiento que contengan arabinosilcitosina o Ara-C.

Ara-C ingresa a las células e inhibe selectivamente el crecimiento de células no neuronales, lo que lleva a su muerte.

Reemplace los medios con medios de mantenimiento nuevos para apoyar la supervivencia de las neuronas.

Para disociar las neuronas del hipocampo para el cultivo, de