Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:48 min. • July 8th, 2025
Comience con fragmentos de tejido del tronco encefálico que contienen glioma pontino intrínseco difuso, un tumor derivado de células progenitoras gliales en un entorno rico en nervios mielinizados.
Tratar con enzimas proteolíticas para degradar la matriz extracelular del tejido.
Después de la incubación, pipetee repetidamente el contenido para facilitar la disociación celular y la degradación de la vaina de mielina.
Filtrar y centrifugar para recoger las células. Retire el sobrenadante y vuelva a suspenderlos en un tampón frío.
Agregue una solución de sacarosa para la separación del gradiente de densidad y mezcle bien.
A continuación, centrifuga para separar las células más pesadas de los restos de mielina más ligeros.
Retire la capa de mielina y agregue un tampón de lisis de glóbulos rojos.
Añadir un tampón frío para detener la acción de lisis. Centrifugar y retirar el sobrenadante para eliminar los glóbulos rojos lisados.
Vuelva a suspender las células en un medio neurobasal tibio y cultívelas en un matraz sin recubrimiento.
La ausencia de factores neurotrópicos provoca la muerte neuronal, mientras que las células progenitoras gliales utilizan nutrientes y factores de crecimiento
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