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Neurociencia
0 vistas • 2:16 min • July 8th, 2025
Comience con una placa de cultivo recubierta con un polímero sintético y una proteína de adhesión.
Agregue células progenitoras neurales de la médula espinal resuspendidas en un medio de diferenciación de neuronas motoras, complementadas con un inhibidor de molécula pequeña.
La superficie de la placa recubierta facilita la adhesión celular.
El inhibidor de molécula pequeña bloquea proteínas quinasas específicas, previniendo la apoptosis celular.
Retire el medio gastado y agregue un medio de diferenciación fresco.
El medio contiene un compuesto que promueve la diferenciación de los progenitores neurales en progenitores de las neuronas motoras.
Además, surgen progenitores gliales comprometidos.
A continuación, reemplácelo con un medio de diferenciación complementado con un inhibidor de la síntesis de ADN.
Estos inhibidores inducen selectivamente el daño del ADN y la muerte en los progenitores gliales, mientras que los progenitores de las neuronas motoras se diferencian en neuronas maduras.
Lavar las células con tampón y añadir el medio de diferenciación sin inhibidores para mantener las neuronas.
Durante el cultivo, reemplace regularmente el medio para reponer los nutrientes.
Además, reemplace el medio con medio suplementado con proteína de adhesión para mejorar la unión neuronal, estableciendo un cultivo homogéneo de neuronas motoras.
Si los cultivos de células progenitoras neurales se congelaron, descongélelos. Después del intercambio de medio y el enjuague de PBS como se describe en el manuscrito, cambie el medio con un medio de diferenciación de neuronas motoras que contenga arabinósido de citosina 0,02 micromolar.
Luego, incube las células durante 48 horas a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono cuando los progenitores comprometidos con la glia emerjan como células planas proliferantes individuales bajo progenitores de neuronas motoras postmitóticas agregados en grupos celulares. Posteriormente, realice el intercambio de medios como se indica en el manuscrito.