Aislamiento de células madre del cerebelo postnatal de ratón y diferenciación en células neurales

Tome células aisladas de un cerebelo de ratón recién nacido que contenga células madre, neuronas y glía.

Agregue microperlas magnéticas recubiertas de anticuerpos que se unen a una glicoproteína de superficie específica de células madre.

Centrifugar, quitar las perlas sueltas y volver a suspender las celdas en un tampón.

Cargue las células en una columna de separación colocada en un separador magnético, que retiene las células madre unidas a microperlas mientras otras células fluyen.

Agregue un medio de neuroesfera para eluir las células y transferirlas a una microplaca. Incubar para inducir la formación de neuroesferas primarias, colonias de células madre que se renuevan a sí mismas.

Centrifugar y desechar el medio. Vuelva a suspender las neuroesferas en un medio que contenga enzimas para digerir las proteínas de adhesión celular.

Centrifugar y eliminar las enzimas. Añadir el medio neurosphere y disociar mecánicamente las células.

Incubar para permitir la proliferación de células madre y la formación de neuroesferas secundarias, mientras que las células diferenciadas que carecen de características de células madre no proliferan.

Transfiera las neuroesferas a un medio de diferencia