Disminuye la cuantificación cognitivos causados ​​por la radioterapia craneal

Deterioro cognitivo como resultado de la gestión de radioterapia de los tumores cerebrales representa una condición clínicamente intratable que afecta negativamente a la calidad de vida. La capacidad de evaluar críticamente las posibles intervenciones para aminorar inducidos por la radiación disminuye cognitivo depende en última instancia la capacidad para llevar a cabo rigurosas evaluaciones cuantitativas de la cognición.

El objetivo general de este procedimiento es cuantificar los cambios conductuales y cognitivos inducidos por la irradiación craneal. El primer paso es poner a prueba la memoria de reconocimiento espacial basada en el hipocampo utilizando la novedosa tarea de reconocimiento de lugares. A continuación, se evalúan los niveles de ansiedad utilizando la tarea del laberinto elevado plus, la formación de la memoria basada en el miedo, utilizando la tarea de condicionamiento justo contextual dependiente del hipocampo y la amígdala, y luego se mide la tarea de condicionamiento del miedo en cola dependiente de la amígdala.

El paso final es administrar la tarea Maurice Water Maze para evaluar el aprendizaje espacial, la memoria espacial y la capacidad de aprendizaje inverso. En última instancia, este protocolo detecta cambios en el estado de ánimo, el aprendizaje espacial y no espacial y la memoria, así como cualquier alteración sensoriomotora inducida por la irradiación craneal. Sin embargo, este método puede proporcionar información sobre los efectos de la irradiación craneal en el comportamiento y la cognición.

También se puede utilizar para otras situaciones en las que la cognición se ve afectada como un efecto secundario no deseado de otras terapias, como en el caso de las alteraciones del aprendizaje y la memoria inducidas por la quimioterapia o el quimiocerebro. Las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la naturaleza lenta de la configuración y optimización del equipo. La interpretación de los resultados puede ser difícil si los procedimientos experimentales no están estrictamente controlados, y la variación en los datos dificulta la detección de diferencias entre los grupos de control y experimentales.

La demostración visual de estas metodologías es fundamental, para que el lector pueda apreciar las sutilezas involucradas en la organización o las salas experimentales en las que se realizan las pruebas cognitivas, así como los procedimientos específicos empleados. Con el fin de garantizar un manejo consistente de los animales, comience la fase de familiarización preparando el entorno de prueba, limpie a fondo dos bloques de plástico idénticos con etanol al 70% y colóquelos en posiciones específicas dentro de la arena. Coloca al animal en el centro de la arena y permítele explorar libremente.

Durante cinco minutos, se puntúan las conductas exploratorias. Utilizando un sistema de rastreo automatizado, la exploración se define como la nariz de un animal que se encuentra dentro de un radio de cuatro centímetros y se dirige hacia los bloques. Cuando se acabe el tiempo, retira al animal a una jaula de retención durante otros cinco minutos.

Durante este tiempo, limpie el campo de pruebas con etanol al 70%. Agregue una copia idéntica de los bloques a la misma posición espacial que durante la fase de familiarización y otra a una nueva posición espacial. Después del intervalo de retraso de cinco minutos, vuelva a introducir al animal en las arenas de prueba para una fase de prueba de cinco minutos y permítale explorar libremente durante tres minutos.

Si se recuerda la disposición espacial de los bloques de la fase de familiarización, la rata pasará más tiempo explorando el bloque en la nueva ubicación espacial. Al día siguiente, los animales son devueltos una vez más a la arena. Para una fase de prueba de 24 horas, nuevamente, un bloque permanece en una posición familiar mientras que otro está en una novela.

Uno, coloca al animal en el centro de la arena y graba la exploración durante tres minutos. El laberinto elevado plus mide los niveles de ansiedad en roedores. Antes de realizar la prueba, asegúrese de que el laberinto se limpie a fondo.

Para comenzar, coloque al animal en la parte central del laberinto mirando hacia el brazo abierto lejos del experimentador, permita que el animal explore durante cinco minutos. El número de entradas y la cantidad de tiempo que se pasa en los brazos abiertos y cerrados se rastrea mediante un software de seguimiento automatizado. Si una rata se cae del laberinto, colócala rápidamente en un brazo abierto y registra el evento.

También tenga en cuenta cualquier comportamiento de congelación junto con las posibles causas. El condicionamiento del miedo es un paradigma conductual en el que los animales aprenden a temer a un estímulo previamente neutro. Al emparejarlo con un estímulo nocivo el primer día, coloque al animal en una cámara completamente limpia.

Comienza la prueba de entrenamiento, que consta de tres fases. La primera es una fase de referencia de cinco minutos en la que no se administra ninguna descarga o tono durante la fase de entrenamiento, se presentan múltiples pares de choque de tonos durante un período de cinco minutos. Finalmente, durante la fase posterior al entrenamiento, se le da al animal otros cinco minutos.

En ausencia de una descarga o tono, el porcentaje de tiempo que cada animal pasa congelado se mide desde los últimos 60 segundos de la fase de referencia y desde los últimos 60 segundos de la fase posterior al entrenamiento. 24 horas después, devuelva el animal a la cámara para una prueba contextual de cinco minutos y registre el porcentaje de tiempo dedicado a la congelación una hora después de la prueba. En el contexto familiar, retire el piso de la rejilla, agregue paneles al exterior de la cámara y limpie con un limpiador doméstico perfumado.

Para probar el condicionamiento del miedo, coloque al animal en el contexto novedoso y registre el comportamiento de congelación en presencia y ausencia del tono que se emparejó previamente con el estímulo nocivo. El Laberinto de Agua de Morris es una prueba de aprendizaje espacial que requiere el uso de señales distales para localizar una plataforma de escape sumergida en una gran piscina de agua opaca, la tarea se administra durante ocho días y consta de cuatro fases, prueba de cola y adquisición. Fase una prueba de sonda de 24 horas y una prueba de aprendizaje inverso.

Para comenzar la prueba en cola, coloque una bandera blanca y negra distintiva en el centro de la plataforma para que la ubicación de escape sea obvia para el animal. Para cada prueba de CUD, coloque al animal en una ubicación de inicio predeterminada diferente en el perímetro de la piscina, mueva la plataforma a un cuadrante diferente. Para cada una de las cuatro pruebas, permita que el animal tenga 30 segundos para encontrar la plataforma de escape.

Si se alcanza el tiempo máximo, guíe a los animales hasta allí con la mano. Permita que el animal permanezca en la plataforma durante 20 segundos antes de colocarlo en una jaula calentada. Al día siguiente, comienza la fase de adquisición que consta de cuatro pruebas por día durante cinco días consecutivos.

Durante esta fase, la plataforma oculta permanece en el mismo lugar y los animales aprenden a navegar hasta ella. Usando señales distales de la habitación, coloque al animal en la piscina en un punto de inicio predeterminado diferente. Para cada ensayo, registre la latencia media para encontrar la plataforma y la longitud de la ruta como medidas de aprendizaje espacial.

Si el animal no ha escapado dentro del tiempo máximo de nado de 60 segundos, se le guiará a la plataforma manualmente y se le permitirá permanecer allí durante 20 segundos. 24 horas después de la prueba de entrenamiento final, realice una prueba de sondeo número 62 en la que se retire la plataforma para determinar la preferencia del animal por el cuadrante que solía contener la plataforma. Después de esta prueba de sondeo, devuelva la plataforma al mismo cuadrante y administre tres pruebas de adquisición adicionales para la prueba de aprendizaje inverso.

El octavo día, mueva la plataforma a una nueva ubicación. Introduce al animal en la piscina y mide la cantidad de tiempo que pasas buscando la plataforma en su ubicación anterior en comparación con la nueva aquí. Los resultados de la tarea de reconocimiento de animales de control e irradiados en la nueva lugar mostraron que las dos posiciones se exploraron por igual durante la fase de familiarización.

Sin embargo, los animales de control mostraron una clara preferencia por la nueva posición espacial después de los intervalos de retardo de cinco minutos y 24 horas, mientras que los animales irradiados no lo hicieron. En el laberinto elevado plus, los animales de control e irradiados pasaron menos tiempo explorando los brazos abiertos de lo que cabría esperar por casualidad. El porcentaje de congelación durante la exposición inicial a la cámara fue muy bajo en comparación con el período posterior al entrenamiento del día siguiente.

El comportamiento de congelación todavía se incrementó dentro del contexto familiar, aunque mucho menos en los animales irradiados cuando se colocaron en un contexto nuevo, el comportamiento de congelación volvió a los niveles de referencia, pero se elevó nuevamente con la presentación del tono en el Laberinto de Agua de Morris. Los animales de control localizaron la plataforma de escape más rápidamente en pruebas sucesivas en comparación con los animales irradiados. Los animales irradiados también tardaron más tiempo y un camino más largo hasta la plataforma en una prueba de sonda, 24 horas después durante la Prueba de Aprendizaje Inverso, cuando se cambia la ubicación de la plataforma, los animales normales dejan gradualmente de buscar en el cuadrante anterior y aprenden la nueva ubicación de la plataforma, mientras que los animales irradiados no lo hacen.

Al realizar estas tareas, es importante tomar notas detalladas sobre cualquier evento o comportamiento anormal, así como sobre cualquier problema de seguimiento que surja y que deba abordarse antes de analizar los datos. No olvide que trabajar con animales de experimentación puede ser peligroso y siempre se deben tomar precauciones como el uso de equipos de protección personal al realizar estos procedimientos. También es fundamental obtener la aprobación institucional y seguir las pautas institucionales y federales para el uso seguro y ético de los animales.