Diferenciación de células corporales embrioides en progenitores neurales mediante ácido retinoico

Comience con células madre embrionarias cultivadas sobre una capa de células alimentadoras de fibroblastos, que mantienen las células madre en su estado indiferenciado.

Agregue enzimas tripsina y EDTA para interrumpir la adhesión de célula a célula y separar las células.

Más tarde, agregue un medio de cultivo enriquecido con suero para detener la actividad enzimática y transfiera la suspensión celular a un tubo.

Centrifugar para recolectar las células, eliminar el sobrenadante y luego volver a suspender las células en un medio que contenga ácido retinoico.

Coloque las gotas de esta suspensión celular en la base de una placa de cultivo no adhesiva.

Invierta la base para formar gotas colgantes y colóquela sobre la tapa de la placa de cultivo llena de un tampón para evitar que las gotas se sequen.

En las gotas colgantes, la gravedad hace que las células se asienten en el fondo, y eventualmente se agreguen en estructuras tridimensionales denominadas cuerpos embrioides.

Además, las células absorben ácido retinoico, que modula varias vías de señalización intracelular.

Esta modulación estimula la diferenciación de las células madre en células progenitoras neurales con la capacidad de prod