Ensayo de mielinización inducida por transducción in vitro para células precursoras de oligodendrocitos

Tome cultivos adherentes de células precursoras primarias de oligodendrocitos, u OPC, en un medio de crecimiento.

Agregue vectores lentivirales de control al pozo de control y vectores de prueba, que codifican proteínas de señalización que regulan la mielinización, al pozo de prueba, luego incube.

Las células internalizan los vectores y el ARN viral se transcribe inversamente en ADN y se incorpora al genoma del huésped, expresando las proteínas de señalización en las células de prueba.

Introducir enzimas para separar los OPC del sustrato.

Neutralice las enzimas y centrifugue para eliminar las enzimas.

Agregue el medio de crecimiento y transfiera los OPC a cubreobjetos dentro de una microplaca con ganglio de la raíz dorsal adherido o neuronas DRG. Permita que los OPC se asienten.

Llene los pozos con el medio de cultivo e incube. La interacción con las neuronas DRG desencadena la maduración de OPC en oligodendrocitos.

Las proteínas de señalización expresadas inducen a los oligodendrocitos a formar vainas de mielina alrededor de las neuronas DRG.

Evaluar la formación de la vaina de mielina inducida por proteínas de señalización en las células de prueba en comparación con las células t