Aislamiento de neuronas marcadas con fluorescencia de un cerebro murino

Tomemos una corteza de ratón transgénica que contiene neuronas fluorescentes que expresan proteínas.

Asegúrelo en un soporte de muestra.

Monte el soporte en la bandeja de vibratomo que contiene aCSF oxigenado para mantener las condiciones fisiológicas del tejido.

Usando los parámetros establecidos, obtenga cortes coronales.

Coloque las rodajas en un soporte de malla que contenga aCSF oxigenado y bloqueadores de actividad para estabilizarlas.

Trate las rodajas con proteasas para digerir la matriz extracelular y aflojar las células.

Lavar con aCSF para eliminar las proteasas.

Transfiera las rodajas a una placa de cultivo con aCSF y suero.

Bajo un microscopio de fluorescencia, diseccionar las regiones de corte que contienen neuronas fluorescentes.

Transfiera los fragmentos disecados a un tubo que contenga líquido cefalorraquídeo y suero.

Disociar mecánicamente el tejido para formar una suspensión unicelular. Transfiera las células a una placa de cultivo que contenga aCSF.

Bajo un microscopio de fluorescencia, use una pipeta capilar para recolectar neuronas fluorescentes.

Dispense estas neuronas en una placa de cultivo que contenga aCSF para su posterior análisis.

Diseccionar el cerebr