Aislamiento y cultivo de células precursoras de oligodendrocitos de la corteza cerebral de cachorros de ratón

Tomemos la corteza de un cachorro de ratón.

Agregue una enzima proteolítica que digiera la matriz extracelular del tejido. Luego, disociar mecánicamente el tejido, aflojando las células.

Agregue medios gliales y ADNasa para degradar cualquier ADN contaminante.

Disociar mecánicamente el tejido para liberar neuronas y células gliales.

Una vez que el tejido no digerido se asiente, recoja el medio que contiene las células y centrifuge. Retire el sobrenadante.

Resuspenda las células en los medios gliales y colóquelas en un matraz recubierto de proteína de matriz extracelular.

incubar. Los astrocitos se adhieren más fuertemente a la superficie recubierta que otras células. Los medios gliales promueven solo la supervivencia de las células gliales.

Reemplace el medio para eliminar los residuos.

Incubar agitando para separar las células precursoras de oligodendrocitos suprayacentes, OPC y microglía.

Transfiera el medio con las células a una placa de cultivo.

Incubar con agitación para facilitar la adhesión microglial diferencial.

Transfiera el sobrenadante OPC no adherente a una placa multipocillo recubierta de poli-D-lisina. Incubar para la adherencia a OPC.

Reemplace los medios con medios