Aislamiento y cultivo de neuronas motoras oculomotoras, trocleares y espinales de un embrión de ratón

Tome un ratón preñado transgénico y extirpe quirúrgicamente el útero con embriones que contengan neuronas motoras marcadas con fluorescencia.

Transfiera el útero a un plato con un tampón helado bajo un microscopio de fluorescencia.

Utilice luz visible para aislar los embriones.

Retire la cara y la cola de los embriones y oriéntelos a una posición prona.

Usando la señal de fluorescencia, haga una incisión en el mesencéfalo para exponer los núcleos oculomotor y troclear, que contienen neuronas motoras.

Aísle el mesencéfalo que contiene los núcleos.

Abrir el lado dorsal del rombencéfalo y la médula espinal. Aísle la médula espinal, extirpe ambos extremos y recoja las columnas que contienen neuronas motoras espinales.

Tratar los tejidos recolectados con enzimas para disociar la matriz tisular. Recolecte las células individuales y aísle las neuronas marcadas con fluorescencia usando FACS.

Agregue un medio de cultivo a las neuronas aisladas, transfiera las células a una microplaca recubierta de sustrato de cultivo e incube, permitiendo que las células se adhieran y crezcan.

Mantener las neuronas motoras en cultivo.

Comience recolectando embriones positivos para EGF de Islet-1 de un ratón