Manipulación de cultivos de células madre neuronales en una instalación de producción de células

Para minimizar la contaminación en los cultivos de células madre neuronales, utilice una instalación con una campana laminar, una cámara tampón, una cámara de proceso y una cámara de microscopio, cada una separada por puertas herméticas.

Ahora, llene de agua en una placa de cultivo en la incubadora para mantener la humedad.

Ajuste la cámara de tampón, la cámara de proceso y los parámetros de la incubadora a niveles óptimos.

Limpie todas las superficies con un desinfectante y una gasa estéril para eliminar los contaminantes microbianos.

Coloque la placa de cultivo de células madre neuronales primero en la campana laminar que proporciona aire filtrado.

Limpie el exterior de la placa con una gasa empapada en etanol y luego transfiérala a la cámara de amortiguación que proporciona aire filtrado con niveles óptimos de gas.

Finalmente, mueva la placa a través de la cámara de proceso hacia la incubadora y cierre la puerta.

Después de la incubación, mueva la placa de cultivo de regreso a la cámara de proceso junto con un poco de medio nuevo.

Equilibra el medio fresco.

Refresque el medio en la placa de cultivo y vuelva a incubar la placa.

Coloque tres placas de Petri en la bandeja de agua en la base de cada incubadora. Llene estos platos con agua estéril y mantenga el nivel de agua en estos platos, ya que son fundamentales para mantener el punto de ajuste de humedad relativa en la incubadora.

Dentro de la interfaz gráfica, haga clic en Incubadora. Posteriormente, haga clic en el valor existente para la humedad relativa debajo del punto de ajuste e ingrese 85%. Luego, haga clic en la marca de verificación verde para aceptar este valor.

A continuación, ajuste las cámaras de amortiguación, la cámara de proceso y una incubadora a los puntos de ajuste de gas necesarios para el tipo de celdas que se introducen. Limpie la superficie de la cámara de proceso con una gasa estéril y un desinfectante no inflamable, como productos a base de cloruro de benzalconio.

Luego, limpie los guantes y las superficies que se tocan comúnmente, como las manijas de las puertas. Posteriormente, limpie la superficie de la campana de flujo laminar y la cámara de amortiguación con etanol al 70% y déjela secar.

Después de eso, coloque el matraz o la placa de células en la campana y limpie brevemente su superficie exterior con una esponja de gasa estéril saturada de etanol. Luego, coloque el matraz o la placa en la cámara tampón y ejecute un factor de dilución. Una vez finalizado, transfiera inmediatamente el matraz o la placa a la incubadora adecuada.

Como la incubadora está en la parte posterior de la cámara de proceso, saque un estante a la cámara de proceso para colocarla en las celdas y evite abrir las puertas de la incubadora innecesariamente o durante largos períodos de tiempo.

En este paso, prepare el medio de cultivo celular. Deje que el medio se equilibre con los niveles de dióxido de carbono y oxígeno presentes en el sistema dejando el recipiente del medio ligeramente destapado durante 20 minutos.

Luego, retire el medio viejo de los pocillos. Para las células madre pluripotentes, elimine casi todo el medio viejo con una pequeña cantidad del medio viejo restante, para evitar la desecación durante el proceso de alimentación. Para las células madre neurales, retire la mitad del medio viejo. Luego, agregue medio fresco a las placas de cultivo celular y vuelva a colocar las placas en su incubadora designada.