Purificación de células precursoras endoteliales CD31⁺ mediante clasificación de células activadas magnéticamente

Tome un cultivo adherente de células progenitoras endoteliales o EPC, precursoras de las células endoteliales microvasculares del cerebro.

El cultivo, obtenido mediante la diferenciación de células madre pluripotentes, comprende EPC positivas para el marcador de superficie CD31 y células contaminantes CD31 negativas.

Incubar con un reactivo de disociación para desprender las células y filtrar para obtener una suspensión unicelular.

Agregue un medio para neutralizar las enzimas, centrifugar para desechar el sobrenadante y volver a suspender las células en un tampón.

Incubar con un reactivo bloqueador para inhibir los receptores celulares Fc, evitando el marcaje inespecífico.

Agregue un anticuerpo conjugado con fluoróforo específico para CD31 e incube para marcar los EPC.

Centrifugar y desechar los anticuerpos no unidos. Incubar con complejos de anticuerpos que contienen un anticuerpo que se une a los fluoróforos.

Introducir nanopartículas magnéticas recubiertas de polímero e incubar, permitiendo que las nanopartículas se unan al segundo anticuerpo de los complejos.

Usando un campo magnético, aísle las células unidas a nanopartículas.

Deseche la suspensión con células CD31 negativas