Generación de organoides cerebrales de tipo prosencéfalo a partir de células madre pluripotentes inducidas por humanos

Comience con una placa de pocillos de baja adhesión que contenga células madre pluripotentes inducidas por humanos o iPSC en un medio de células madre suplementado con un inhibidor de la Rho-quinasa.

Los inhibidores ingresan a las células, bloquean las enzimas Rho-quinasa y mantienen la viabilidad celular. Esto promueve la formación de agregados de iPSC.

Reemplace el medio con un medio de células madre para permitir que crezcan los agregados. Transfiéralos a una placa de cultivo de baja adherencia con un medio de inducción cortical.

Los componentes de este medio hacen que las iPSC se diferencien en células neuroectodérmicas, un precursor neural.

Transfiera cada agregado neuroectodérmico a una película con pocillos poco profundos.

Reemplace el medio con una matriz de membrana basal e incube para permitir la solidificación de la matriz y el atrapamiento de agregados.

Transfiera estos agregados incrustados en la matriz a un plato que contenga un medio de inducción cortical e incube con agitación.

Con el tiempo, las células neuroectodérmicas utilizan los factores de diferenciación y se convierten en células neuroepiteliales.

Cambie el medio a un medio de diferenciación de organoides, q