Generación de células endoteliales cerebrales a partir de células madre pluripotentes inducidas

Tome un cultivo de células madre pluripotentes inducidas, o iPSC, en medios de mantenimiento que contengan inhibidores de la rho-quinasa.

Los factores de crecimiento mantienen las células indiferenciadas, mientras que los inhibidores de la rhoquinasa mejoran la supervivencia celular.

Reemplace el medio con medios de mantenimiento nuevos, eliminando los inhibidores de la rhoquinasa. Incubar, promoviendo la formación de colonias.

Reemplace regularmente con medios no acondicionados, lo que proporciona un entorno controlado, desencadenando la diferenciación de iPSC en progenitores neurales y luego células endoteliales cerebrales, seguidas de proliferación celular.

Reemplazar con medios de células endoteliales que contengan ácido retinoico y factores de crecimiento de fibroblastos. Incubar.

Los factores de crecimiento de fibroblastos facilitan la proliferación celular, mientras que el ácido retinoico promueve la maduración de las células endoteliales cerebrales.

Agregue enzimas proteolíticas para separar las células. Recoge las células y centrifuga. Deseche el sobrenadante.

Vuelva a suspender las células en medios endoteliales y siembre en un inserto de membrana de múltiples pocillos re