Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:08 min. • July 8th, 2025
En una placa de cultivo, cubra un cubreobjetos con poliornitina, un polímero cargado positivamente, e incube.
La poliornitina forma una capa similar a una malla que ayuda a que las células cargadas negativamente se adhieran al cubreobjetos.
Retire la solución y lave los cubreobjetos con una solución salina tamponada para eliminar la poliornitina no unida.
Agregue una solución que contenga una proteína de matriz extracelular llamada laminina e incube.
La laminina forma una matriz sobre el cubreobjetos recubierto de poliornitina, lo que mejora la unión celular.
Deseche la solución y tome una pequeña cantidad de células madre neurales suspendidas en un medio libre de factores de crecimiento.
Agregue este cultivo de baja densidad sobre el cubreobjetos preparado con un movimiento de rotación lenta para distribuir uniformemente las células.
Inicialmente, la privación del factor de crecimiento promueve la división celular.
Con el tiempo, las células madre se diferencian en neuronas con proyecciones largas
Eventualmente, las neuronas producen estructuras similares a la columna vertebral sobre sus proyecciones, como las neuronas piramidales corticales.
Para preparar cultivos neuronales, coloque cubreobjetos de vidrio en placas de cultivo de seis pocillos y agregue poliornitina. Incube durante la noche bajo una campana de flujo. Al día siguiente, use DPBS para lavar los cubreobjetos tres veces y agregue laminina. Incube bajo una campana de flujo durante al menos 10 horas.
Prepare un medio de cultivo que contenga los siguientes componentes. Luego, use el medio para colocar y enviar células madre neurales o NSC a una densidad de 50,000 células por centímetro cuadrado, pipeteando con movimientos de rotación lentos para reducir la agrupación celular.