Preparación de cortes colínculo-talamocorticales a partir del cerebro de un cachorro de ratón

Coloque el cerebro de un cachorro de ratón en un tobogán con su lado dorsal hacia arriba.

Recorta la parte frontal del cerebro y vuelve a colocarla en la superficie plana creada.

Alinee la superficie dorsal y la línea media del cerebro en el portaobjetos. Corte en ángulo para alinear las estructuras auditivas conectadas del mesencéfalo y el prosencéfalo. Estas estructuras son el colículo inferior o IC, el cuerpo geniculado medial o MGB, el núcleo reticular talámico o TRN y la corteza auditiva o AC.

Fije la superficie del cerebro cortada angularmente en una etapa de muestra de vibratomo con bloques de agar, asegurándose de que el rombencéfalo esté apoyado en el bloque más delgado.

Transfiera la platina al vibrátomo y agregue un tampón para evitar daños en los tejidos.

Comience a cortar para localizar el IC, MGB, TRN y AC.

Recupere el corte que contiene las regiones conectadas, denominado corte colículo-talamocortical, y transfiera el corte a una cámara de retención para preservar la viabilidad del tejido.

Para preparar la etapa de corte para el corte, corte un pequeño trozo de agar al 3% de aproximadamente 1 centímetro cúbico para usarlo como respaldo para el cerebro, y otro trozo de 1,5 centímetros por 1,5 milímetros por 3 milímetros para usarlo como protuberancia para sostener el colículo inferior.

A continuación, pegue el tope trasero en el escenario con adhesivo de cianoacrilato y luego pegue la protuberancia en el lado derecho del tope de manera que formen un ángulo de 80 grados. En una diapositiva marcada con dos líneas a 90 grados y una línea diagonal a 17 grados desde la parte superior izquierda hasta la parte inferior derecha, coloque el cerebro con el lado dorsal hacia arriba en el punto de intersección de las dos líneas.

Con una cuchilla de afeitar, retire de 2 a 4 milímetros del extremo rostral del cerebro para crear una superficie plana. A continuación, coloque el cerebro con el lado caudal hacia arriba sobre la superficie plana recién creada. Alinee la superficie dorsal del cerebro con una línea horizontal y la línea media del cerebro con una línea vertical marcada en la diapositiva. Luego, alinee la hoja de afeitar con una línea de 17 grados. Incline la maquinilla de afeitar en un ángulo de 30 grados y elimine aproximadamente 3 milímetros de la corteza derecha en un doble corte diagonal.

Para montar el cerebro en la etapa de vibratomo, coloque un pequeño trozo de papel de filtro en el lado ventral del cerebro para que la dimensión larga sea perpendicular a la línea media. Aplique con cuidado una pequeña cantidad de adhesivo de cianoacrilato en el área frente al tope trasero y a la izquierda de la protuberancia. Posteriormente, coloque el lado del cerebro doble cortado en diagonal sobre el pegamento de modo que la parte caudal del cerebro y el cerebro posterior estén apoyados en la protuberancia, y el lado derecho del cerebro esté contra el respaldo.

En este procedimiento, coloque rápidamente la etapa de corte en el vibrátomo. Llene el escenario con solución de corte. A continuación, alinee la hoja con la parte superior del cerebro. Retire de 1 a 1,5 milímetros de la parte superior del cerebro. Luego, corte y retire más rodajas de 300 a 500 micrómetros mientras avanza más profundamente.

Cuando el colículo inferior, el cuerpo geniculado medial y el núcleo geniculado lateral son visibles, la circunvolución dentada debe aparecer en forma de C y la estructura debe estar alineada. Obtener unas dos rodajas de 600 micrómetros. Estos son los cortes colculotalamocorticales. Después de eso, transfiéralos a la cámara de retención de 32 grados centígrados.