Inducción in vitro de uniones neuromusculares a partir de células madre pluripotentes inducidas por humanos

Comience con iPSC humanas diseñadas que contienen un gen inducible por doxiciclina que codifica la proteína mioblasto o que codifica la proteína MYOD en un medio de células madre que contiene inhibidores de la Rho-quinasa.

Transfiera las células a placas recubiertas de ECM e incube para promover la unión celular.

Mientras tanto, el inhibidor inactiva las enzimas Rho-quinasa intracelulares, mejorando la viabilidad celular.

Reemplace el medio con un medio de células madre que contenga doxiciclina.

La doxiciclina ingresa a las células y se une a las proteínas activadoras. Estos complejos se unen al promotor, induciendo la expresión génica en algunas células y produciendo proteínas MYOD, que desencadenan la diferenciación de células madre en células musculares.

Tratar las células con un medio de diferenciación miogénico que contenga factores de diferenciación miogénicos para promover la formación de miotubos, una célula muscular multinucleada.

Posteriormente, introducir un medio de inducción neural con factores de crecimiento neuronal.

Estos factores diferencian las iPSC restantes en neuronas motoras y células de Schwann que forman una vaina de mielina alrededor de las neuronas.

Finalm