Obtención de una suspensión unicelular a partir de tejido del hipocampo de ratón
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:42 min. • July 8th, 2025
Tome fragmentos de hipocampos de ratón adultos perfundidos en un tubo de disociación que contenga papaína y ADNasa.
Coloque el tubo en un disociador mecánico.
El disociador desintegra mecánicamente el tejido, aflojando las células, incluidas las neuronas y las células gliales.
La papaína descompone la matriz extracelular del tejido, liberando células. La ADNasa degrada el ADN contaminante.
Agregue tampón que contenga BSA, inactivando las enzimas.
Pase la suspensión a través de un colador para eliminar los desechos grandes.
Centrifugar el filtrado. Deseche el sobrenadante rico en enzimas.
Vuelva a suspender las células en tampón y transfiéralas a un tubo nuevo.
Agregue medios de gradiente de densidad, mezcle y superponga la mezcla con tampón.
Durante la centrifugación, las células y los desechos forman capas separadas según sus densidades.
Retire la capa de amortiguación superior y la capa de escombros del medio.
Agregue tampón a la capa inferior que contiene las celdas y mezcle. Centrifugar y desechar el sobrenadante que contiene el medio de gradiente de densidad.
Vuelva a suspender las células del hipocampo en el tampón para su posterior análisis.
Con fórceps, transfiera las pieza
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