Preparación de una suspensión unicelular de células inmunitarias a partir de tejido cerebral murino

Comience con un cerebro murino con células neuronales, no neurales e inmunitarias dentro de la matriz extracelular o ECM del cerebro.

Picar el tejido y volver a suspenderlo en un medio de cultivo.

Transfiera estos fragmentos de tejido a un tubo y trátelos con enzimas colagenasa y ADNasa-I.

La colagenasa digiere la ECM, liberando células individuales, mientras que la ADNasa-I degrada el ADN libre para evitar la aglomeración celular.

Luego, agregue EDTA para inactivar las enzimas colagenasa.

Agregue un medio de cultivo. Centrifugar y eliminar el sobrenadante.

Agregue una solución de gradiente de densidad y el medio de cultivo al gránulo celular, creando una capa de gradiente de baja densidad.

Mezcle y luego aplique la solución con una solución de gradiente de alta densidad para establecer una diferencia de densidad.

Centrifugar a baja velocidad para separar las células inmunitarias en la interfaz, con restos celulares más ligeros en la parte superior y células neuronales y gliales más pesadas en la parte inferior.

Retire la capa superior, recoja las células inmunitarias y transfiéralas a otro tubo.

Centrifugar y eliminar el sobrenadante, luego volver a suspender las celdas en un medi