Una técnica para optimizar el cultivo de organoides cerebrales mediante iluminación lateral con luz suave

Tome una configuración de iluminación de luz suave lateral que contenga una placa acrílica equipada con almohadillas blancas y luces LED blancas instaladas en un borde.

Coloque una placa de pocillos múltiples de baja adhesión que contenga un medio de formación de cuerpo embrioide en el frente.

Agregue los cuerpos embrioides o EB a la placa.

La luz LED entra por el lateral de la placa acrílica y emite haces paralelos, iluminando lateralmente los EB y permitiendo la visualización a simple vista.

Gire la placa para inducir un flujo de remolino, haciendo converger los EB hacia el centro.

Reemplace el medio gastado con medio de formación EB nuevo.

Recoja los EB con una punta de pipeta de gran diámetro.

Sostenga la pipeta en posición vertical para permitir que los EB se asienten por gravedad.

Transfiera los EB a otra placa de baja adhesión que contenga un medio de inducción neural.

Toca la punta con el medio. Los EB se hunden debido a la tensión superficial del líquido.

Factores específicos en el medio inician la diferenciación neuronal en los EB, formando una capa neuroepitelial.

Use una pizarra acrílica transparente con un grosor de 0,3 a 0,5 centímetros en el tamaño de papel A5 y pegue almohadillas blancas en la parte delantera y trasera de la placa acrílica. A continuación, instale una fila de luces blancas LED en el borde de la placa para que las luces puedan entrar por el costado de la placa acrílica y luego dispararse en paralelo.

Ahora, prepare una nueva placa de seis pocillos de baja adherencia y agregue 2 mililitros de medio de formación EB a cada pocillo. Después de retirar los EB junto con el medio, utilizando una punta de pipeta de gran diámetro de 1000 microlitros, transfiera aproximadamente 100 EB por pocillo a la placa de baja adherencia de 6 pocillos.

Para reemplazar el medio de formación EB todos los días con el mismo volumen de medio fresco, induzca un flujo de remolino girando el plato a lo largo de una órbita circular. Los EB u organoides convergen hacia el centro del pozo debido al flujo secundario generado a través de la rotación. Aspire el medio viejo pipeteando hasta el borde del pocillo lentamente. No chupe demasiado fuerte, de lo contrario, los EB se eliminarán juntos. A continuación, agregue medios nuevos para volver a suspender los EB.

Para la inducción neural, prepare una nueva placa de 6 pocillos de baja adherencia con 3 mililitros de medio de inducción neural por pocillo. Encienda la luz suave lateral y apague otras fuentes de luz interior. Ahora, transfiera los EB a la placa de 6 pocillos con medio de inducción neural agregado utilizando una punta de pipeta de boca ancha para succionar tanto los EB como el medio de cultivo. A continuación, sostenga la pipeta en posición vertical. Los EB se hundirán gradualmente bajo la gravedad y convergerán hacia la boca de la punta de la pipeta.

Cuando la boca de la punta de la pipeta vuelve a tocar la superficie del líquido, y debido a la tensión superficial del líquido, los EB se hunden rápidamente en el medio. Incube las muestras a 37 grados centígrados y dióxido de carbono al 5% durante 24 horas.