Análisis de la reactivación de células madre neurales en explantes de cerebro de Drosophila cultivados

En respuesta a estímulos externos, las células madre neurales del cerebro de Drosophila, o NSC, salen de la quiescencia, un estado de detención del ciclo celular, y se reactivan para comenzar la proliferación.

Tomemos las larvas de Drosophila recién nacidas, una etapa en la que las NSC salen naturalmente de la inactividad in vivo.

Agarra los ganchos de la boca y el cuerpo para dividir la larva.

Ubique el cerebro detrás de los ganchos bucales y elimínelo.

Transfiera los cerebros a pocillos de placas de cultivo que contengan medios.

En los pocillos tratados, el medio contiene una hormona de prueba, mientras que los pocillos de control carecen de la hormona. Incubar.

En condiciones de control, las NSC permanecen inactivas debido a la ausencia de estímulos externos.

En los pocillos tratados, la hormona se une a receptores específicos de NSC, activando vías de señalización aguas abajo y reactivando las NSC.

Las NSC reactivadas entran en el ciclo celular y proliferan.

Después de la incubación, los cerebros ahora están listos para el análisis posterior para visualizar la proliferación de NSC, lo que confirma el potencial de reactivación de la hormona.

Diseccionar los cerebros de las larvas colocadas en la segunda placa de reloj de vidrio con SSM, usando fórceps bajo un microscopio de disección y ajustando el aumento según sea necesario. Use una pinza para agarrar los ganchos bucales y con la otra, agarre suavemente el cuerpo hasta la mitad y tire en la dirección opuesta para dividir la larva en dos pedazos. Después de diseccionar de 15 a 20 cerebros, agregue 1 mililitro de SSM en un pocillo de una bandeja de cultivo estéril de 24 pocillos. Con una micropipeta y una punta estéril, transfiera los cerebros recién disecados al SSM, seguido de la incubación de los medios con los cerebros durante 24 horas a 25 grados centígrados.