Aislamiento de oligodendrocitos primarios murinos mediante perlas inmunomagnéticas

Tome una suspensión de células neurales, incluidos oligodendrocitos inmaduros y células neuronales primarias, de un cachorro de ratón.

Vuelva a suspender las células en un tampón magnético de clasificación de células para evitar la aglomeración de células.

Agregue microperlas magnéticas diseñadas que transportan anticuerpos anti-O4 en su superficie. Agite la solución para asegurar una mezcla uniforme.

Incubar para permitir que las microperlas se unan con galactolípidos sulfatados, un antígeno O4 en los oligodendrocitos, mientras que otras células permanecen unidas o sueltas.

Lave la mezcla con un tampón de clasificación de células adicional.

Centrifugar y desechar el sobrenadante, luego volver a suspender las células.

A continuación, pase las células unidas a perlas en una columna de separación magnética equipada con un filtro que elimina los grupos de células más grandes.

Durante la ejecución, bajo un campo magnético, los complejos unidos a las perlas se mueven hacia el imán, adhiriéndose a los lados.

Lave para eliminar las células sueltas y sueltas.

Recupere la columna del separador y lávela con un medio de proliferación para recolectar los oligodendrocitos primarios para futuras aplicaciones.

Después de contar, centrifugar las células nuevamente y volver a suspender el sedimento en 90 microlitros de tampón de clasificación de células magnéticas frescas por 1 x 10⁷ células. A continuación, agregue 10 microlitros de perlas anti-O4 por 1 x 10⁷ celdas y mezcle la solución celular con movimientos suaves. Después de 15 minutos a 4 grados centígrados, con movimientos suaves, cada 5 minutos, agregue suavemente 2 mililitros de tampón magnético de clasificación de celdas por 1 x 10 7 celdas para un lavado por centrifugación y deseche el sobrenadante mediante una cuidadosa aspiración al vacío.

Vuelva a suspender el pellet en 500 microlitros de tampón de clasificación de células magnéticas frescas por cada 1 x 10⁷ células y coloque una columna de clasificación de perlas magnéticas del tamaño adecuado en su separador magnético correspondiente. Coloque un colador de 40 micras en la columna y enjuague previamente el colador con 3 mililitros de tampón magnético de clasificación de celdas, dejando que el tampón pase a través de la columna sin dejar que la columna se seque. Agregue las celdas al colador, seguido de un lavado de 1 mililitro con tampón magnético de clasificación de celdas.

Lave la columna tres veces con 3 mililitros de tampón magnético de clasificación de células por lavado, y una vez con medio de proliferación de oligodendrocitos. Luego, transfiera la columna a un tubo de 15 mililitros y use el émbolo para enjuagar inmediatamente 5 mililitros de medio de proliferación de oligodendrocitos nuevos a través de la columna.