Marcaje de marcadores de superficie de células neuronales con Azidosugar mientras se cocultiva con células endoteliales

Comience agregando una suspensión de células endoteliales de cerebro de ratón al inserto de membrana permeable de una placa transwell.

Agregue un medio de crecimiento al pozo inferior e incube.

Los factores de crecimiento y los nutrientes en el medio ayudan a que las células crezcan como una monocapa.

Retire el medio del pozo inferior y del inserto.

Lave las superficies internas y externas del inserto para eliminar cualquier residuo.

Agregue un medio adherente al inserto y transfiera el inserto a un pocillo recubierto de matriz que contenga células madre y progenitoras neurales corticales primarias, o NSPC, e incube.

Agregue azidoazúcar, un análogo precursor del ácido siálico no natural, tanto a las células endoteliales como a las NSPC, e incube.

Las citocinas y quimiocinas secretadas por las células endoteliales promueven el crecimiento de las NSPC en clones grandes en forma de lámina.

Los azidoazúcares se integran en las estructuras de sialoglicanos en la superficie celular de NSPC, marcando la glicoproteína. Esto permite la identificación de proteínas de la superficie celular en las NSPC expandidas.

Para preparar las células endoteliales, vuelva a suspender un gránulo de células