Preparación de tubos endoteliales cerebrales a partir de arteriolas parenquimatosas de ratón

Asegure un cerebro de ratón, con el lado ventral hacia arriba, en un plato recubierto de polímero de silicio que contenga tampón.

Diseccionar una sección de tejido del hemisferio alrededor de la arteria cerebral media, o MCA, con el segmento de tejido superior que se extiende más allá del punto de ramificación del Círculo de Willis.

Asegure el tejido con el MCA hacia arriba.

Retire la piamadre, con las arteriolas, que se ramifican desde el MCA.

Asegure la piamadre con las arteriolas. Diseccionar la arteriola y extraer el tejido circundante. Deseche las ramas distales.

Incubar la arteriola en un cóctel de enzimas proteolíticas para facilitar la digestión parcial del segmento.

Reemplace las enzimas con tampón y transfiera el segmento digerido a una cámara que contenga tampón en una platina de microscopio equipada con una pipeta de trituración.

Pipetear la arteriola repetidamente para eliminar la adventicia aflojada y las células del músculo liso, lo que da como resultado un tubo intacto que contiene células endoteliales arteriolares.

Coloque el lado ventral del cerebro hacia arriba en una cámara que contenga una solución de disección fría para aislar las arteriolas parenquimatosas. P