Obtención de cortes horizontales de cerebro de hipocampo de ratón

Tome los hemisferios cerebrales del ratón en una solución con alto contenido de sacarosa. Asegure los hemisferios con el lado ventral hacia arriba en una placa de muestra de vibratomo con un adhesivo.

Transfiera la placa de muestras a la cámara de corte.

Agregue una solución semicongelada con alto contenido de sacarosa para mantener las condiciones fisiológicas del tejido y solidificar el adhesivo.

Suministre una mezcla de dióxido de carbono y oxígeno para mantener la oxigenación de los tejidos.

Usando los parámetros establecidos, obtenga los cortes iniciales y elimínelos. Además, obtenga cortes horizontales del hipocampo.

Transfiera con cuidado estos cortes de cerebro a una cámara que contenga ACSF para la recuperación del tejido.

Los cortes horizontales del hipocampo están listos para una mayor experimentación.

Coloque ambos hemisferios en el lado dorsal recién cortado con la parte ventral del cerebro hacia arriba y coloque una gota de superpegamento en una placa de muestra. Use una punta de pipeta para esparcir el pegamento en un área grande para acomodar ambos trozos de tejido y toque un trozo de correa de papel de filtro en el lado ventral de un hemisferio. Use otra correa de papel de filtro para semisecar cuidadosamente el lado dorsal del cerebro y coloque el lado dorsal del hemisferio hacia abajo sobre el pegamento en la placa de muestra.

Use dos correas de papel de filtro adicionales para colocar el segundo hemisferio en el pegamento como se acaba de demostrar, y coloque la placa de muestra en la cámara de corte. Luego, rápida pero cuidadosamente, cubra el plato con una solución de rodajas helada con alto contenido de sacarosa. Para adquirir secciones del tejido cerebral, coloque la hoja del vibratomo frente al lado medial de los hemisferios y levante la mesa del vibratomo de modo que la hoja esté a la misma altura que los lados ventrales de los hemisferios, que ahora están hacia arriba.

Use el control de vibratomo para bajar la hoja 600 micras más en la dirección dorsal y corte el tejido hasta que las dos primeras rodajas estén completamente separadas de los dos hemisferios. Cuando se hayan obtenido las dos primeras rodajas de tejido, invierta la dirección de corte y baje la cuchilla otras 300 micras antes de volver a cortar. Cuando el hipocampo se haga visible, utilice una pipeta Pasteur de plástico ensanchada para recoger y transferir las rodajas a la cámara de recuperación en el baño de agua.