Generación de cortes de amígdala inclinados a partir de un cerebro de ratón

Tomemos un cerebro de ratón sumergido en un amortiguador helado.

Retire el cerebelo y recorte la sección anterior que contiene la corteza prefrontal medial o mPFC.

Fije el tejido a un bloque de agar en ángulo, que se pega en una platina de muestra de vibratomo.

Coloque bloques de agar adicionales para proporcionar estabilidad durante el corte. Coloque la platina dentro de la cámara de corte de vibrátomo llena de tampón oxigenado helado.

Generar cortes inclinados que contengan la amígdala que respondan a los estímulos del miedo y las proyecciones neuronales de la mPFC, que forman conexiones sinápticas en la amígdala y regulan su actividad.

Los cortes inclinados exponen las proyecciones, lo que permite el estudio de la conectividad funcional entre el mPFC y la amígdala.

Corta las rodajas por la mitad y colócalas en una cámara que contenga líquido cefalorraquídeo artificial oxigenado a temperatura ambiente para estabilizar el tejido.

Incube los cortes a la temperatura fisiológica para recuperar el tejido para los ensayos posteriores.

Use un bisturí para cortar el cerebelo. Luego, aísle la porción anterior del cerebro que contiene la corteza prefrontal medial. Llene la cámara de corte con una solución de corte helada mantenida a 4 grados centígrados con una unidad de enfriamiento. Oxigenar la solución.

Seque el cerebro con papel de filtro. Pegue el bloque de agar al 4% que se ha cortado en un ángulo de 35 grados con respecto a la etapa vibratoria y pegue la parte posterior del tejido cerebral en este bloque. Pegue dos bloques de agar adicionales delante y detrás del bloque cerebral para mayor estabilidad mientras corta.

Coloque la platina con tejido adherido en la cámara de corte y asegúrese de que esté sumergida. Comience a cortar las rodajas agudas. Corte cada rebanada por la mitad y transfiérala a una cámara de interfaz suministrada con ACSF oxigenado a temperatura ambiente. Después de cortar las rodajas agudas de la amígdala, coloque la cámara de interfaz en un baño de agua a 36 grados centígrados y deje que las rodajas se recuperen durante 35 a 45 minutos.