Una técnica para aislar núcleos de células no neuronales en el giro dentado del hipocampo

Tome la circunvolución dentada de un cerebro de ratón en un tampón de homogeneización en frío.

Disociarse mecánicamente para liberar neuronas, glía y células madre.

El detergente suave del tampón permeabiliza las células, liberando núcleos y otros orgánulos.

Filtrar el homogeneizado para eliminar los restos de tejido. Luego, centrifuga, retira los orgánulos y vuelve a suspender en el tampón de homogeneización para lisar las células intactas.

Centrifugar nuevamente, eliminar el sobrenadante que contiene los orgánulos liberados y volver a suspender los núcleos en un tampón de lavado.

Filtrar para eliminar cualquier residuo, centrifugar y eliminar el sobrenadante.

Introduzca una tinción de ADN fluorescente para marcar todos los núcleos y un anticuerpo conjugado con fluoróforo que se une al antígeno nuclear neuronal, o NeuN, que marca los núcleos de las neuronas.

Mediante la clasificación de núcleos activados por fluorescencia, identifique agregados con mayor intensidad de fluorescencia de tinción de ADN y mayores propiedades de dispersión, separando los núcleos individuales.

Analizar los núcleos individuales, separando los núcleos neuronales positivos para NeuN y aislando los núcleos